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黄芪益肾胶囊处方由淫羊藿、黄芪、山药等组成，为我院协定处方，主要用于糖尿病肾病的治疗，其汤剂经临床多年验证，安全、有效。为方便患者，将汤剂改为胶囊剂。本试验对其制备工艺进行了研究，并对其总黄酮含量进行了测定。
1 仪器与材料
1.1 仪器 METTLER TOLEDO AG245型十万分之一电子天平（瑞士METTLER公司）；HITACHI U-3000型紫外分光光度计（日本HITACHI公司）；BUCHI R-114型旋转蒸发仪（瑞士BUCHI公司）。
1.2材料 淫羊藿、黄芪、山药等药材（均购自安徽海鑫中药饮片有限公司，并经我院主管中药师鉴定）；淫羊藿苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110737-200312）；甲醇、乙醇等均为分析纯，蒸馏水为新鲜自制。
2黄芪益肾胶囊的制备
2.1总黄酮的UV法测定
2.1.1标准曲线的绘制 准确称取干燥至恒重的淫羊藿苷对照品5mg，精密称定，置50ml容量瓶中，加甲醇超声溶解并定容至刻度，得每1ml含0.1mg的对照品溶液。精密量取1.5ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml、3.5ml、4.0ml上述对照品溶液，分别置25ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。以相应溶剂为空白，在270nm处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，以浓度（μg/ml）为横坐标，绘制标准曲线，其回归方程为Y= 0.0452X-0.0004，r=0.9997，表明淫羊藿苷在5.928~15.808μg/ml与吸光度线性关系良好。
2.1.2样品的测定 分别取10粒胶囊用除山药外的其他药材9份，煎煮或回流提取。提取液滤过后定容到500ml容量瓶中，分别精密吸取上述溶液2ml置25ml容量瓶中，加甲醇至刻度，在270nm处测定吸光度，根据回归方程计算样品中黄酮类化合物的量。
2.2 淫羊藿等药材的提取
因处方中淫羊藿、黄芪等药材主要含有黄酮类成分，故采取加液提取的方法；山药含有大量淀粉，故粉碎过筛后，直接入药。
2.2.1 淫羊藿等药材的提取 采用L9（34）正交实验设计，考察提取溶媒、溶媒用量、提取次数、提取时间对药材中总黄酮提取的影响，以确定较优的总黄酮提取工艺。因素、水平见表1，正交试验安排及结果见表2。
表1 因素、水平表
水平因素
提取溶媒溶媒用量（倍）提取次数提取时间（h）
1水1011
230%乙醇1222
350%乙醇1433
表2 正交试验安排及结果
No提取溶媒溶媒用量（倍）提取次数提取时间（h）总黄酮量（mg）
11（水）1（10）1（1）1（1）75.56
212（12）2（2）2（2）88.64
313（14）3（3）3（3）96.32
42（30%乙醇）12375.98
5223183.31
6231259.23
73（50%乙醇）13277.69
8321355.65
9332170.56
Ⅰj260.52229.23190.44229.43
Ⅱj218.52227.6235.18225.56
Ⅲj203.9226.11257.32227.95
Rj56.623.1266.883.87
表3 方差分析
因素离均差平方和自由度均方FP
A575.952287.98354.76P<0.01
B1.6220.81
C773.862386.93476.67P<0.01
D2.5421.271.57P>0.05
F0.01（2,2）=99.0，F0.05（2,2）=19.0，F0.1（2,2）=9.0
结果表明，4种因素对总黄酮提取的影响程度依次为C>A>D>B，其优化组合为A1B1C3D1。提取次数与提取溶媒对总黄酮的提取有极显著影响，提取时间与溶媒用量影响不明显。综合考虑，选择加水煎煮提取3次，每次1小时，第一次用10倍量溶剂，第二、三次用8倍量溶剂。
2.2.2 淫羊藿等药材提取工艺验证 为确证总黄酮提取工艺的优劣与稳定性，对所筛选的优化条件进行验证。结果表明，所筛选的提取工艺基本稳定，10粒胶囊处方量淫羊藿等药材提取的总黄酮平均为96.12mg（n=3）。
2.3 山药的处理
山药含有淀粉量较多，故留作制剂时的辅料用，既是一味药，又兼作辅料，一物二用，可直接入药，故将山药直接粉碎，过筛，备用。
2.4黄芪益肾胶囊的制备
根据上述提取工艺与处理方法，对黄芪益肾胶囊处方药物进行提取和处理，药粉混匀，过筛，按装量为0.3g装硬胶囊，即得。
3黄芪益肾胶囊中总黄酮的含量测定
3.1供试品溶液的制备
取三批黄芪益肾胶囊样品，每批取胶囊20粒，倾出内容物，分别混合均匀，取细粉0.2g，精密称定，置磨口三角烧瓶中，精密量取50%乙醇20ml加入，精密称定总重，放置1小时，回流提取1小时，放冷，精密称重，补足溶剂至原重。滤过，精密量取续滤液1.0ml置25ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
3.2总黄酮含量测定
精密吸取浓度为0.1mg/ml的淫羊藿苷对照品溶液2.5ml，置25ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液。取对照品溶液及样品溶液在270nm处测定吸光度，计算，结果见表4。
表4 样品含量测定结果
批号样品重（g）吸光度含量（%）平均含量（%）平均每粒胶囊中含总黄酮量（mg）
200704160.19440.46983.313.239.69
0.19610.45113.15
200704170.20830.47013.073.189.54
0.19270.46403.28
200704180.19740.46533.213.159.45
0.19860.45043.09
结果三批样品平均每粒胶囊中总黄酮含量分别为9.69mg、9.54mg、9.45mg。
4 讨论
4.1因处方中淫羊藿、黄芪等药材主要含有黄酮类成分，故以总黄酮为指标对提取条件进行优选。预试验中曾采用水提醇沉的方法提取总黄酮，结果发现醇沉后总黄酮会有损失，故正交试验设计用水、30%乙醇和50%乙醇进行提取。
4.2正交试验的结果考察，本来欲选择干膏率和干膏中总黄酮含量为指标，但是操作繁琐，比较麻烦，而选择以提取液中的总黄酮含量为指标则相对合理，且方法简便。
4.3对黄芪益肾胶囊总黄酮含量测定方法的考察，有另文详述。
参 考 文 献
1国家药典委员会编。中华人民共和国药典（一部）[S],北京：化学工业出版社，229
2范碧亭。中药药剂学[M].上海：上海科技出版社，2001:90
3张琳，张瑾。淫羊藿总黄酮的提取方法研究[J].现代中药研究与实践，2004,18（5）：63 |
本刊论文